• 咨询电话:0771-2310996
  • 扫一扫,添加微信号

首页 >> 技术支持 >> 实验方法 >> 乙酰化蛋白快速检测和定量

乙酰化蛋白快速检测和定量

发布时间:2022-05-30 17:02:03 | 来源:

用乙酰化抗体填料及HRP标记乙酰化抗体快速检测和定量细胞总乙酰化蛋白

一、IP-ELISA联合方法原理及流程:

方法原理及流程说明:

1) 从实验组和对照组组的细胞中分别取400微克粗蛋白,每组用10uL抗乙酰化抗体琼脂糖填料富集(IP)。

2) 结合于琼脂糖填料上的的乙酰化蛋白每次用100微升0.1 M HCl,洗脱两次。

3) 将洗脱液汇集在一起,用饱和碳酸钠调节pH值至中性。

4) 然后取洗脱液100微升/孔包被于酶标板上,重复包被两孔,在室温下培养过夜。

5) 第二天用PBSt清洗板孔2次,用0.1%BSA inPBSt封闭板孔,孵育30分钟,再用PBSt洗涤三次。

5) 在37℃下添加HRP标记的抗乙酰化抗体(用0.1%BSA in PBSt稀释到0.25 ug/mL)30分钟。

6) 用PBSt清洗板孔4次,每孔加100微升TMB,培养30分钟显色。

7)每孔10 uL 2M 硫酸终止显色。在450 nm处读取吸光度。

8) 通过OD(处理)/OD(未处理)计算反应性乙酰化蛋白水平。

实例1:分析用不同浓度的TSA处理12小时的细胞中的总乙酰化蛋白水平。即先用抗AcK琼脂糖填料IP,再以ELISA方法用HRP标记的抗乙酰化抗体做检测不同浓度TSA处理的细胞中,快速检测出其蛋白质乙酰化增加达10倍。

二、IP-WB联合方法高确定性检测乙酰化蛋白

实例2:分别用HDAC抑制剂TSA处理5和15小时后,对MMRU细胞样品中的乙酰化蛋白质进行Western blot分析。即样品先用抗乙酰化赖氨酸琼脂糖亲和富集(IP),再用WB方法,加入HRP标记的抗乙酰化抗体进行检测,快速得到高确定性的WB结果。

三、快速检测乙酰化蛋白所用到的相关抗体试剂

试剂中文名称

试剂英文名称

货号

使用范围

规格

抗乙酰赖氨酸抗体琼脂糖填料

Acetyl Lysine Antibody, Agarose

ICP0388-2mg

IP

2mg

抗乙酰赖氨酸抗体琼脂糖填料

Acetyl Lysine Antibody, Agarose

ICP0388-5mg

IP

5mg

HRP标记抗乙酰赖氨酸抗体

Acetyl Lysine Antibody, HRP

ICP0381

ELISA, WB

100ug

FITC标记抗乙酰赖氨酸抗体

Acetyl Lysine Antibody, FITC

ICP0385

IF

100ug

生物素标记抗乙酰赖氨酸抗体

Acetyl Lysine Antibody, Biotin

ICP0383

ELISA, WBIHC

100ug

抗乙酰赖氨酸抗体(多克隆)

Acetyl Lysine Antibody

ICP0380

ELISA, WBIHC,IF

100ug

抗乙酰赖氨酸抗体(单克隆)

Acetyl Lysine AntibodyMouse Monoclonal

ICP0390

ELISA, WBIHC,IF

100ug

乙酰化蛋白偶联物

Acetylated BSA

ICP6090

ELISAcompetitive inhibitor

5mg

联系我们
电    话:0771-2310996 传    真:0771-2310995 E-mail : 735565094@qq.com 技术支持E-mail: immunechem@gmail.com   备案号:桂ICP备09007987号 地    址:广西南宁市高新技术开发区科园大道68号东盟慧谷11栋203室 530007