扫一扫，添加微信号
以每次制备5个疫苗（偶联OV）为例：
1. 称取0.3g OV，溶解于5ml 0.1M Na2CO3。彻底溶解后于12000rpm离心2min，转上清到洁净的50mL离心管，加入1mL冷丙酮，冷却到4度后备用。
2. 称取75 mg NHS-活化碘乙酸酯 （考虑杂质，用75mg） ，加入300µL的 DMF（富马酸二甲脂），彻底溶解后于10000rpm离心1min，取上清备用，同时留沉淀备用。
3. 边涡旋边逐滴将步骤2的上清液慢慢滴入步骤1的上清液（OV液），转速不能过大，避免起气泡。
4. 在步骤2的沉淀中再次加入100µL的DMF，重悬后于10000rpm离心1min。取上清重复3一次。
5. 将步骤4得到的OV-碘乙酸混合物（pH>9）放到4度，避光孵育15分钟 （每隔5分钟摇晃一次）。
6. 离心后，OV-碘乙酸混合物(6 mL)过脱盐柱（40 mL），方法为：将OV-碘乙酸混合物（大概6mL）均匀滴加到脱盐柱表面，同时计量流出液空量。补加PBS维持液面。弃掉前面15mL空量体积，收集10mL滤液（OV大约25mg/mL），按2mL/管分装备用。【注意每次均需现配现用】
7. 按1 mL比5mg多肽比例，在5管多肽中各加入约1mL【0.1M Na2CO3+10mM EDTA】，混匀溶解。
8. 将步骤7准备好的多肽，按每种多肽（5mg/mL）加入到步骤6分装好的2mL脱盐OV-碘乙酸混合物，混匀。【测PH,PH必须大于7;注意步骤7和8要一管一管的做。】
9. 摇床上低速摇动1小时后，加入4倍体积（12mL）的冰冻丙酮，4度沉淀蛋白质30分钟。
10. 6000rpm离心10分钟，去上清（另外保留，备ELISA检测用），沉淀加入50mL蒸馏水，将抗原稀释成1mg/mL（沉淀部份也是疫苗）。分装冻存备用（制备注射前注意把沉淀也包含在内）。
