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亲和填料制备操作步骤

发布时间:2019-07-12 14:51:37 | 来源:

1. 将25mL的氨基-琼脂糖珠转移到50mL洁净的空柱子,用500mL蒸馏水漂洗。

2. 用50mL 50%的冷丙酮洗1次,溶液即将完全进入胶层时,加入50mL 75%的冷丙酮洗1次,溶液即将完全进入胶层时,再加入100mL 100%冷丙酮洗1次。

3. 溶液即将完全进入胶层时,加入含有1mL三乙胺的50mL 丙酮溶液,当溶液(还剩)1/3在胶层上时,反复震荡重悬琼脂糖珠。

4. 用2mL DMF(富马酸二甲脂)溶解150mg NHS活化的碘乙酸,彻底溶解后,1000转离心1分钟,取上清边振荡边逐滴加入3重悬好的琼脂糖珠,盖紧,室温避光反应45分钟。

5. 流干琼脂糖珠液体,用100mL 100%丙酮洗1次,溶液即将完全进入胶层时,用含有0.1N HCL的50mL 75%的冷丙酮洗1次,溶液即将完全进入胶层时,用含有0.1N HCL的50mL 50%的冷丙酮洗1次。

6. 流干琼脂糖珠液体,用500 mL蒸馏水洗1次。

7. 将琼脂糖珠分成5份,5mL/(份)管,排尽水分,可用于5个多肽抗原的偶联。

8. 用1mL含有10mM EDTA的0.1 M Na2CO3溶液溶解5mg抗原多肽,加入“7”准备好的活化琼脂糖珠,用2mL蒸馏水洗多肽瓶,洗液转到活化琼脂糖珠。振荡重悬琼脂糖珠,室温中速摇床上反应60分钟。

9. 流干琼脂糖珠液体,回收液体(含有游离的抗原,可以用于ELISA抑制时用)。

10. 按照新填料的使用步骤进行抗体纯化实验。 11.用ELISA法检测比较抗体纯化前后的效价变化情况,判断填料提纯效果。 注意:第8步要先配现用,尽量避光,防止多肽上的巯基氧化(-SH -S-S- )

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