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抗体生产流程

发布时间:2019-07-12 14:51:13 | 来源:

一、流程图:疫苗免疫→采血→亲和层析柱提取→脱盐→检测→分装→成品

二、操作程序:

(一)血清生产及过程检测:

1、疫苗

2、注射兔子第一次

3、注射兔子第二次(第14天)

4、注射兔子第三次(第28天)注射

5、第35天每兔采1滴血做ELISA

6、第42天滴度<1:3200每兔采1滴血做ELISA,注射第四次。滴度≥1:3200的 第42天采多量血,注射第四次。

7、第49天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。

8、第56天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第五次滴度≥1:3200的 第56天采多量血。

9、第63天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。

10、第70天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第六次滴度≥1:3200 的第70天采多量血,注射第五次。

11、第77天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。

12、第84天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第七次滴度≥1:3200 第84天采多量血,以后每15天采血一次。

13、第91天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。做ELISA后,结果仍<1:3200,则决定处置兔子。

14、滴度≥1:3200的 第98天采血,注射第六次,以后每15天采血一次。每30天注射一次。

(二)抗体提纯及检测

1、过柱:收集血清至约100ml时过柱,根据血清的ELISA滴度、第一次和第二次过柱所得沉淀量的差异,决定过柱血清量。抗体收集:1)滴度高的、重要的抗体用丙酮来沉淀所收集的抗体液,其他抗体用硫酸铵沉淀。2)抗体量多的,加入磷酸三钠中和后,用蒸馏水透析1小时,再用0.1M的磷酸三钠透析2小时(透析方法见透析膜操作步骤LGBZ-008),然后想腊肠那样风干,待体积极小了,倒入试管中,上冻干机冻干(动感方法见冻干机说明书。)。

2、抗体量小的,先用硫酸铵沉淀,收集够足够量后,用一蒸水逐渐溶解至透明,用G25脱盐柱脱盐。(具体步骤见脱盐柱脱盐步骤LGBZ-007)

3、冻干后的抗体,用小勺刮下抗体粉末、称重、放入适宜的试管内盖紧,测好百分含量后标记好后,-20度保存;同时称少量抗体样品做检测用,称好的抗体样品放入1.5ml离心管,按抗体重量加入适量50%甘油+PBS,让抗体浓度大约在1-5mg/ml之间。

4、检测抗体样品:

1)蛋白浓度(具体步骤见BCA法蛋白定量操作步骤)

2)抗体滴度(具体步骤见ELISA检测步骤LGBZ-010)

3)WB(具体步骤见免疫印迹实验步骤)

5、标记

检测蛋白浓度后,以检测蛋白浓度日期为抗体批号,在标签纸上写上抗体名称、蛋白浓度、滴度、WB稀释度,贴在管壁,再用封口胶将标签文字覆盖防水。放-20度保存。

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